實驗目的

　　1．掌握FISH技術(shù)的一般原理，及其基本實驗方法；　

　　2．了解FISH技術(shù)的發(fā)展概況，以及應用范圍。

實驗原理

FISH是以分子雜交為基礎，應用非放射性熒光物質(zhì)標記核酸探針，通過堿基互補的原理與靶DNA雜交，在核中或染色體上顯示靶DNA序列位置的方法。FISH技術(shù)可分為四個步驟：樣品制備、探針標記、雜交及其檢測。

實驗準備

　　1．材料染色體標本或血涂片

　　2．儀器低溫高速離心機、熒光顯微鏡、VELP漩渦混勻器、移液器、恒溫水浴鍋、培養(yǎng)箱、烤箱

實驗方法與步驟　　

　　 1．探針混合與變性

　?。?）混合20～60ng標記探針DNA和3～5μg鮭精DNA。反應后體積少于10μl，可直接凍干；若體積較大，可加1/20體積的3mol/L乙酸鈉和2倍體積100%乙醇沉淀DNA。混勻并于-70℃30min。在4℃，12000r/min離心10min，棄上清，沉淀物以300μl70%乙醇洗滌后在離心（同上），棄上清，凍干。

　?。?）將DNA重懸于5μl去離子的甲酰胺中，室溫旋渦混勻3min。

　　（3）加入5μl雜交緩沖液，漩渦混勻器中混勻5min。

　?。?）將DNA探針置于75℃水浴中變性5min。迅速置于冰浴中5min，備用。　

　　 2．樣本處理

    意大利VELP推出了創(chuàng)新性紅外感應漩渦混合器，紅外傳感是VELP創(chuàng)新性的產(chǎn)品。VELP紅外感應漩渦混合器，一旦檢測到試管，VELP漩渦混合器自動開始震動，不需要施加任何外力，而且相比于傳統(tǒng)的接觸模式，VELP紅外傳感漩渦混合器能確保在震動減少過程的急劇變化。VELP漩渦混合器確保了樣品的穩(wěn)定性。VELP漩渦混合器zui大轉(zhuǎn)速可以達到3000rpm，VELP漩渦混合器可以滿足大部分實驗室的需求。VELP漩渦混合器技術(shù)紅外感應震動可以在實驗中解放您的雙手，讓實驗更快捷、更準確！

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